DNA聚合酶的作用部位是 3‘,5’磷酸二酯键。DNA聚合酶的功能是将单个的脱氧核苷酸分子连接形成DNA链，它以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA。在DNA复制过程中，DNA聚合酶在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按照模板DNA上的指令（即A与T，C与G的配对原则），逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，从而逐步合成延长中的子链DNA。
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