RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录聚合酶链式反应，是一种在体外模拟DNA复制过程，以检测特定RNA序列的技术。其步骤和原理如下：
逆转录过程
RNA提取：首先从样本（如组织、细胞或病毒颗粒）中提取总RNA，确保其完整性。
转录：利用逆转录酶，以提取的RNA为模板，合成互补DNA（cDNA）。这一步骤是RT-PCR技术的关键，使得原本只存在于RNA中的遗传信息得以被转化为DNA形式，从而能够被PCR技术所扩增。
PCR扩增过程
模板DNA的变性：将cDNA加热至一定温度（如93℃左右），使其双链解离成为单链，以便与引物结合。
引物与模板DNA的退火（复性）：将温度降低至一定范围（如55℃左右），使引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。引物是人工合成的寡核苷酸序列，能够特异性地识别并结合到模板DNA的特定位置。
引物的延伸：在DNA聚合酶的作用下，以dNTP（脱氧核糖核苷三磷酸）为反应原料，按照碱基互补配对原则，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。这一步骤在PCR仪的循环扩增过程中反复进行，使得目标DNA序列的拷贝数呈指数级增长。
结果检测
通过上述步骤，可以获得足够数量的DNA片段，这些片段可以通过凝胶电泳、实时荧光定量或其他方法进行检测，以确定特定基因的表达水平或检测特定RNA序列的存在。
RT-PCR技术灵敏度高，能够检测到极低浓度的RNA样品，广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因克隆等领域。
